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总RNA的提取原理及方法?
RNA抽取一般使用Trizol法抽提: Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。 目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。 Trizol作用原理: 在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。 水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。
为什么DNA和RNA的提取方法不同?
因为DNA称作脱氧核糖核酸，RNA称作核糖核酸，两者的化学物质和存在的地方都是完全不同的，所以它的提取方式也是完全不同的。 不同的原因是： RNA分子量小，集中于细胞质中，易分解。 DNA分子量较大，集中于细胞核中，化学性质稳定。 因此提取RNA时要使用YZRNA酶的试剂，并要除去DNA污染。 提取DNA时需要破核。
制备rna的关键步骤?
制备 RNA要注意RNA的降解和污染物。关键步骤在于： 1）匀浆处理：将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。 样品体积不应超过TRIzol体积10%。 单层培养细胞：直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。 TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。 细胞悬液：离心收集细胞，每5-10×106 动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。 一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理溶液均。需用DEPC处理过的水配制溶液。 2．匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。